产品目录

过氧化氢（H2O2）检测试剂盒是一种利用过氧化氢特异性橙红色荧光探针O18进行过氧化氢检测的试剂盒。O18可自由透过活细胞膜进入细胞内，并被细胞内的过氧化氢氧化，产生橙红色荧光产物。根据活细胞中红色荧光的产生，可以判断细胞过氧化氢含量的多少和变化。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察，是一种快速简便的组织或培养活细胞中过氧化氢检测方法。
在激发波长560nm，发射波长575nm附近，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光，从而测定细胞内过氧化氢（H2O2）水平。


● 使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；
● 背景低，灵敏度高；
● 线性范围宽，使用方便。
检测方法：
● 流式细胞仪● 荧光显微镜● 激光共聚焦
样本类型：
● 悬浮细胞● 贴壁细胞
试剂盒以外自备试剂耗材和仪器：
● 激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪，激发波长560nm，发射波长575nm。
● 离心机● 移液器● PBS ● HBSS

组份	100T	200T
过氧化氢（H2O2）荧光探针O18	50μL	50μL×2

-20℃避光保存，有效期6个月。
注：
● 长期不用-20℃保存。
● 避免反复冻融。
● 可以根据需要分装后冻存。
● 染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
● 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。


● 螺旋盖微量管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
● 荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
● 探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。
● 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
● O18探针在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。
● 对不同的细胞和组织，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察过氧化氢的变化。


O18探针标记：
1.O18溶液可在新鲜无血清培养基、HBSS缓冲液、PBS缓冲盐溶液稀释到所需浓度，200～1000倍稀释，以此染色工作液更换细胞培养基；也可直接向细胞孵育液体中加入O18探针溶液至所需浓度。
注：
● 开始实验前，使用HBSS缓冲液或无血清培养基稀释染料储存液到需要的工作浓度。工作浓度应根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度，建议至少在超过10倍范围的浓度下进行测试。一般染色终浓度200～2000倍稀释，500～1000倍适合大多数细胞样本。
● 建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。
● 工作液现配现用。
2.依据细胞过氧化氢含量的不同，O18终浓度可选择在200～1000倍稀释的范围，孵育时间可选择10～90分钟，在37℃或室温进行避光孵育。
3.孵育结束后，用新鲜溶液清洗细胞或组织。
4.用相关仪器进行荧光检测。
注：
● 荧光强，过氧化氢强度高。
荧光显微镜检测：
1.对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下染色观察；
2.对悬浮生长细胞，染色后取25～50μL细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。
3.荧光显微镜检测。
流式细胞仪分析：
1.对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用0.5～1mL冰冷PBS重悬细胞（5～10万）。
2.采用560nm波长激发，测定575nm的发射，过氧化氢阴性细胞仅有很低的荧光强度，过氧化氢阳性细胞有较强的橙红色荧光。
相关搜索：过氧化氢检测试剂盒(定性)